各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)應(yīng)對新冠肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制(領(lǐng)導(dǎo)小組、指揮部):
為指導(dǎo)各醫(yī)療機(jī)構(gòu)做好新冠病毒核酸檢測工作,我們總結(jié)了湖北省、武漢市核酸檢測實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),組織制定了《新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測技術(shù)指引》(可在我委官網(wǎng)“醫(yī)政醫(yī)管”欄目下載)。現(xiàn)印發(fā)給你們,供在新冠病毒核酸大樣本應(yīng)急篩查中參考使用。
?
?
國務(wù)院應(yīng)對新型冠狀病毒肺炎
疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制醫(yī)療救治組
(代章)
2020年7月21日
(信息公開形式:主動公開)
?
新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測
技術(shù)指引
?
一、適用對象
新型冠狀病毒核酸篩查稀釋混樣技術(shù)(以下簡稱稀釋混樣)僅適用于大人群樣本的篩查,稀釋混樣檢測結(jié)果不作為最終確診依據(jù)。在人群總體陽性率較低(低于0.1%)時(shí)更為適宜。以下人群不建議采用稀釋混樣檢測:
(一)重點(diǎn)區(qū)域人群(近期有疫情發(fā)生的小區(qū)含確診病例和無癥狀感染者、老舊小區(qū)、人口密集小區(qū)、流動人口聚集區(qū)和近期離省外出人群)、其他不適合稀釋混樣檢測的人群;
(二)醫(yī)療機(jī)構(gòu)就診患者。
二、實(shí)驗(yàn)室條件
(一)根據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》(國務(wù)院424號令),具備在設(shè)區(qū)的市級人民政府衛(wèi)生健康主管部門備案的生物安全二級及以上實(shí)驗(yàn)室。
(二)根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號),具備經(jīng)過省級衛(wèi)生健康行政部門審核備案的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。
(三)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室(常稱為第三方實(shí)驗(yàn)室)應(yīng)當(dāng)符合《醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本標(biāo)準(zhǔn)(試行)》《醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范(試行)》等要求。
三、生物安全要求
根據(jù)《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知》(國衛(wèi)辦醫(yī)函〔2020〕53號)和《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南(第二版)》的有關(guān)要求,采樣和實(shí)驗(yàn)室檢測人員應(yīng)采用生物安全三級實(shí)驗(yàn)室級別的個人防護(hù)。檢測工作完成后,廢棄物嚴(yán)格按照文件要求處理,不得保存樣本。
四、操作流程
(一)材料準(zhǔn)備。
1.采樣管。常規(guī)采樣管,推薦含病毒保存液1~2ml的標(biāo)準(zhǔn)采樣管。
2.咽拭子。
3.振蕩器。
4.其他開展核酸檢測的常規(guī)物質(zhì)準(zhǔn)備。
(二)采樣與混合。
1.咽拭子采樣方法。被采集人員頭部微仰,采樣者將拭子越過舌根,在被采集者兩側(cè)咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次,將拭子頭浸入含1~3ml病毒保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液)的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。
2.樣本混合。將采集的數(shù)個樣本(原則上不超過5個)各取200ul進(jìn)行充分混合,形成混合待檢樣本。
(三)核酸檢測。
核酸提取與檢測過程按有關(guān)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行。每一次上樣擴(kuò)增中,80個加樣孔用于加入混合樣本(如5混1,總計(jì)80×5個單樣本);10個加樣孔用于單樣本(單樣本來自上述80×5個原液的隨機(jī)樣本)。
(四)陽性結(jié)果判斷與重測。
1.檢測結(jié)果先按照各檢測試劑盒使用說明書的要求,對被檢測基因位點(diǎn)逐一判定,出現(xiàn)任一位點(diǎn)陽性或能測出Ct值的混合樣本,均作為重測對象。
2.混合樣本檢出Ct值,其所有的單個原液樣本需重新取樣,按照常規(guī)方法進(jìn)行單樣本核酸檢測。
3.單樣本檢出陽性,其所在混合樣本要全部按常規(guī)方法進(jìn)行單樣本核酸檢測。
五、質(zhì)量控制
(一)室內(nèi)質(zhì)控。每批上樣檢測應(yīng)當(dāng)在剩余加樣孔中設(shè)置1個弱陽性質(zhì)控樣本和三個陰性質(zhì)控樣本(2份生理鹽水和1份陰性混合樣本)。3份陰性質(zhì)控樣本隨機(jī)放在臨床樣本中間。弱陽性質(zhì)控測定為陽性,3個陰性質(zhì)控全部測定為陰性,視為在控。反之,則為失控,不可發(fā)出報(bào)告,應(yīng)分析原因,必要時(shí)重新檢測樣本。
(二)室間質(zhì)評。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加省級及以上臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評價(jià)(EQA)活動,按照活動要求完成質(zhì)評物接收、儲存、檢測和回報(bào)檢測結(jié)果等工作。
六、注意事項(xiàng)
(一)注意避免采樣過程中的交叉污染,落實(shí)一人一消毒;混樣室在每進(jìn)行一批樣本稀釋混樣操作后,應(yīng)進(jìn)行消毒處理。
(二)拭子應(yīng)完全浸潤在病毒保存液中,樣本在混合前后充分震蕩(在振蕩器上振蕩30秒)。
(三)稀釋混樣檢測必須提取核酸,禁用“一步法”。
(四)建議對試劑檢測靈敏度進(jìn)行評估,應(yīng)選擇靈敏度較高的檢測試劑。
(五)稀釋混樣檢測的陰性樣本按每批次擴(kuò)增留取一份陰性樣本備查。