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油污土壤中脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選

文檔作者：袁樹先，趙巖，郭成，蓋秋竹文檔來(lái)源：赤峰學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2023年03月19日
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研究報(bào)告
中國(guó)釀造
2012年第31卷第5期
總第242期·135·
油污土壤中脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選
袁樹先，趙巖，郭成，蓋秋竹
(赤峰學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000)
摘要：為了獲得脂肪酶產(chǎn)生菌的菌種，進(jìn)而獲得高酶活菌株。通過(guò)添加橄欖油作為唯一碳源進(jìn)行富集培養(yǎng)，然后以透明圈平板篩選
法從富油土樣中篩選出能夠在溴甲酚紫培養(yǎng)基上形成黃色透明圈的菌落，再在羅丹明B的培養(yǎng)基上得到高話菌種以及水解圈大小，
搖瓶復(fù)篩得高活菌株，進(jìn)而測(cè)定酶的活力，經(jīng)篩選有l(wèi)O株脂肪酶產(chǎn)生菌酶活力較高。
關(guān)鍵詞：脂肪酶；篩選；活力
中圖分類號(hào)：TIQ920．1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0254—5071(2012)05—0135—02
Sc塢ening of hp鵲e p川ucil瑪s缸i11s in oil丘eld
yUAN Sjluxian，乃{(lán)AO YaIl，GUo Chen舀GAI Qiu吐u
tscbool ofL渝sciences，Chi詫ng College，Chi蠡mg 02鈞oo，China)
Ab曲mct：IIl order to Dbtaill lip弱e巾roduciIlg sⅡain of tlle bacteria．Thus oblaill high actiVity strains．By adding oliVe oil as tlle sole carbon source for
e—chrnent culture，and t|len a仃ansparent血g pIate screening method to sc代en out丘-om me soiI sampIes can be fomled on bromocresoI purpIe
medi哪yellaw transparent circle colonies，and men cultured iIl Rh0(1a][niIle B，Based on也e live bacteria'aS well as to get bigh hydrolysis ring size
naSk waS rc-screening high-liVing stmiIls，and men meaSured the en巧me actiVity pmbably，mere arc four snaills of lipase by screening bacteria produce
hjgber em可me actiViIy。
Kcy words：lipase；screening；acdVity
脂肪酶是甘油酯水解酶，能將甘油三酯催化水解為
游離脂肪酸和甘油，并且能進(jìn)行催化酯化作用、交換酯化
作用、酸解、醇解、氨解，從而提高甘油三酯的水解活性【”。
脂肪酶已被廣泛應(yīng)用于食品、石油化工、洗滌劑行業(yè)㈣、日
用化學(xué)品合成、生物制藥、造紙、廢物處理【孓q等行業(yè)，是重
要的工業(yè)用酶，其廣泛的存在于動(dòng)、植物和微生物中。由于
微生物種類多、繁殖快、易發(fā)生遺傳變異，具有比動(dòng)植物更
廣的作用pH、作用溫度范圍以及底物專一性，且微生物來(lái)
源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶，適合于工業(yè)化大生
產(chǎn)和獲得高純度樣品，因此微生物脂肪酶是工業(yè)用脂肪酶
的重要來(lái)源，并且在理論研究方面也具有重要的意義【刁。本
研究是從油污土壤中分離得到的產(chǎn)脂肪酶菌株，經(jīng)篩選后
得高酶菌株，從而確定其活力大小以及產(chǎn)酶菌種，為后續(xù)
脂肪酶基因工程的構(gòu)建等工作奠定基礎(chǔ)等一系列問(wèn)題提
供理論依據(jù)。
1材料與方法
I．1材料
從學(xué)院餐廳附近油污土壤中采集的土樣。
1．2培養(yǎng)基及發(fā)酵條件
I．2．1富集培養(yǎng)基(％)
(NH4)2S04 0．1，NH{N03 0．1，NaCl O．1，MgS04·7H20
0．05，K2HP040．1，橄欖油1．0，pH值為7．0。
1．2_2分離培養(yǎng)基(％)
(M{4)2S04 0．1，NH斜03 0．1，NaCl 0．1，MgSO。·7H20
0．05，K2l{P0。0．1，瓊脂1．5，橄欖油乳化液【8】12．0，1．6％溴甲
酚紫嘲0．1，pH值為7．0。
l，2．3初篩培養(yǎng)基(％)
(NH4)2s04 0．1，奪iHN03 0．1，NaCl 0．1，Mgs04‘7H20
O．05，K2HP0。0．1，瓊脂1．5，橄欖油乳化液12．0，1．6％溴甲
酚紫0．I或者0．05％羅丹明Bflq 2．O，pH值為7．0。
1．2．4種子斜面培養(yǎng)基(％)
NaN03 0．2，MgS04·7H20 0．05，K2HP04 0．1，KCl O．05，
FeS0。·7H20 0．001，蔗糖3．0，瓊脂2．5，pH值為7．0。
1．2．5發(fā)酵培養(yǎng)基(％)
Q叮H4)2SO。0．1，MgS04·7H200．1，K2HPO。0．1，蔗糖0．5，
橄欖油O．5，蛋白胨3．o，pH值自然。
1．3試劑
45InL無(wú)菌生理鹽水(帶玻璃珠)，9mL無(wú)菌生理鹽水，
酶活力檢測(cè)試劑，磷酸緩沖液f{{j。
1．4方法
1．4．1富集培養(yǎng)
采集的土樣稱取59溶子45n止無(wú)菌生理鹽水(帶玻璃
珠)作l：10稀釋，充分搖勻，靜止，取稀釋液5mL加入到裝
有50mL富集培養(yǎng)基的三角瓶中，在搖床上30cc，18附min，
振蕩培養(yǎng)5d。
1．4．2分離
從產(chǎn)生混濁的富集培養(yǎng)液取樣，作梯度稀釋(1 0_2~10‘7)，
即取富集樣液ImL加入到9Il_1L無(wú)菌生理鹽水的試管中，振
蕩搖勻，制成濃度為10之的稀釋液，再?gòu)闹形mL加入到
另一支9nlL無(wú)菌生理鹽水的試管中制成濃度為104的稀釋
收稿日期：2011一11．24
作者簡(jiǎn)介：袁樹先(1967一)，女，內(nèi)蒙古赤峰人，實(shí)驗(yàn)師，主要研究方向應(yīng)用微生物。

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